问:本人拿菌液让生工测序,结果是双峰,是什么意思?怎么回事?重组的质粒用酶切鉴定没有问题。

答:1、有可能是基因重复,重复的两个拷贝之间有一个硷基的差异。样品本身被污染,这常常发生在样品为质粒和菌液的情况中。当使用通用引物测序时,如果刚好和样品中的几个质粒均能结合,那么就会出现这种情况,而且在同一位置上还可能有不止两个峰形。

2、测序出现双峰(套峰)要根据具体情况来判断可能造成原因,1)是单个碱基套峰还是很多,2)是开始就套峰还是从某一特定位置(譬如插入位点)开始套峰。如果是单个碱基套峰,可能不是单克隆,也可能质粒在自己复制是就产生两中碱基;很多碱基套峰如果是开始就套峰,很可能是测序引物选择不好,不具有特异性,如果是在特定位置(譬如插入位点)开始套峰,非单克隆可能性很大。具体情况具体对待,不看到测序实际情况,单凭以上你的描述,很难发现你的sample问题所在。

3、不是一种克隆菌,需要从新划板,挑取单个菌落培养再测序。


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